BRAF y EGFR mutaciones dirigidas drogas cócteles serían evasión contra proteína exitosa nueva molécula-PLX4032-vemurafenib con cáncer de colon, dijo que los investigadores holandeses.

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27 De enero de 2012: fuente: naturaleza

A mutación en el BRAF ()V600Egen) pacientes de melanoma puede ser exitosa en mejor pequeñarazón por un PLX4032() molécula -vemurafenib)- como medicina. Se sabe que en cáncer intestinal una porción de los pacientes con la misma mutación (gen BRAF V600E) un papel en el surgimiento de tal forma de cáncer intestinal. Sin embargo, estos pacientes tienen un mal pronóstico y estudios señalan que la mencionada hasta ahora significa no o apenas contribuye al control sobre esta forma de cáncer intestinal. Darmkanker demostrar tener un escape ruta qué celdas estimuladas por el vemurafenib molecular, dice René Bernards, líder de una investigación que se realiza en el hospital de NKI-Anthonie van Leeuwenhoek. Los investigadores hicieron pruebas de laboratorio y ensayos con animales con células darmkanker en combinación con vemurafenib. Luego analizaron la producción de la pieza por pieza de todas las proteínas que intervienen en el crecimiento celular y muerte celular. Finalmente demostró que sólo la proteína EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico) asegurada de que las células tumorales sobrevivan a pesar de la vemurafinib de knden. En el NKI, quieren configurar rápidamente un estudio con pacientes darmkanker que reciben tanto la combinatiebehandleing que una mutación BRAF como el EGFR. Desde el resumen de vemurafinib respectivamente naturaleza, entiendo que puede ser o Tarceva Iressaen combinación con.

Aquí el resumen de la naturaleza donde, si usted también puede ver el estudio completo informe aquí contra pago en

Combinación de drogas de inhibidores de BRAF y EGRF puede significar un tratamiento exitoso para ciertas formas de cáncer de colon

Apatía o colon cáncer a la inhibición de BRAF (V600E) a través de la activación de comentarios o EGFR

href = 3 > "http://www.nature.com/nature/journal/vnfv/ncurrent/full/nature10868.html#a2", 2
  • 1 René Bernards&
    • Nombre del diario:
    Naturaleza
    Año publicado:
    (2012)
    DOI:
    doi: 10.1038/nature10868
    Inhibición de la oncoproteína BRAF (V600E) por el fármaco de molécula pequeña PLX4032 (vemurafenib) es altamente1eficaz en el tratamiento del melanoma. Sin embargo, BRAFque albergan a los pacientes de cáncer de colon (V600E) misma lesión oncogénica mal pronóstico y mostrar sólo una respuesta muy limitada a esta droga2 3 4. Para investigar la causa del efecto terapéutico de BRAFPLX4032 limitadas o (V600E) en los tumores de colon mutante, aquí se realiza una pantalla genética basada en la interferencia de RNA en células humanas para buscar quinasas cuyo knockdown synergizes con inhibición de BRAF (V600E). Nos informan el bloqueo de la sinergia factor de crecimiento epidérmico (EGFR) receptor muestra fuerte con inhibición de BRAF (V600E). BRAFencontramos en (V600E) varios cánceres de colon mutante que inhibición o EGFR por el cetuximab drogas de anticuerpos o la molécula pequeña droga gefitinib o erlotinib es fuertemente sinérgica con la inhibición de vitro en BRAF (V600E), ambos en vivoy. Una, nos encontramos con que la inhibición de BRAF (V600E) provoca una retroalimentación rápida activación o EGFR, que apoya la continua proliferación de inhibición en la presencia de BRAF (V600E). Las células de melanoma expresan bajos niveles de EGFR y por lo tanto no están sujetas a esta activación de retroalimentación. Consecuente con esto, ectópico expresión de EGFR o nos parece que en melanoma células es suficiente para causar resistencia a PLX4032. BRAFnuestros datos sugieren que mutante (V600E) (aproximadamente 8-10% de colon todos los cánceres de colon
    cánceres2 3 5,,), para que no hay actualmente ningún tratamiento específica opciones disponibles, podrían beneficiarse de una terapia combinada consistente en BRAF y EGFR inhibidores.

    Cifras de un solo vistazo

    izquierda
    1. Figura 1: inhibición de EGFR confiere sensibilidad a la inhibición de BRAF (V600E) en cáncer de colon.

      b células una, CRC, pero no melanoma ocultando la mutación de BRAF son resistente al tratamiento PLX4032 (V600E). unensayo de inhibición de crecimiento a corto plazo o un panel de línea de células que consta de células de melanoma (A375) y CRC (VACO432, SNU-C5, HT29, KM20 y WiDr). Las células fueron tratadas con aumento de las concentraciones o PLX4032 de 72 h y celda viabilidad se determinó mediante CellTiter - azul midiendo la absorbancia a 540 nm en un lector de microplacas. ErrorBars mostrar datos ± error de estándar. Medios fueron derivados (n = 4) cuatro repeticiones. bensayo de formación de Colonia a largo plazo o CRC (VACO432, KM20 y WiDr) y las células de melanoma (A375). Las células fueron cultivadas en la ausencia o presencia de PLX4032 en las concentraciones indicadas para 10-14 días. Para cada línea celular, todos los platos se fija al mismo tiempo, teñidos y fotografiados. c, contorno esquemática de la pantalla 'deserción' de RNAi para potenciadores o sensibilidad PLX4032. Virus de kinome humana CVR ARNhc biblioteca policlonales fue producido para infectar las células WiDr, que luego quedaron sin tratar (control) durante 10 días o tratados con 1 µ M PLX4032 durante 18 días. Después de la selección, inserciones de ARNhc de ambas poblaciones fueron recuperadas por reacción en cadena de polimerasa (PCR) y identificadas por secuenciación profunda (deepseq). d, representación de la abundancia relativa de las secuencias de código de barras de ARNhc de crepresenta el experimento de pantalla ARNhc en. Y-eje muestra el enriquecimiento (abundancia relativa o PLX4032 tratados tratada) x-eje muestra la intensidad y el (lecturas de secuencia promedio de muestra sin tratar) o cada ARNhc. Entre los 22 candidatos ARNhc superior (más de fivefold empobrecido por el tratamiento de PLX4032 y más de 300 lecturas en la condición sin tratar (como se ha indicado por las líneas rojas discontinuas) shEGFR , tres vectores independientes (en rojo) se identificaron.

    f e, EGFR , tres shRNAs independientes destinados a mejorar la respuesta a PLX4032. e, los fenotipos funcionalesEGFR o no superpuestos sh vectores son indicada por ensayo de formación de Colonia en 1 µ M PLX4032. El vector de pLKO fue utilizado en el experimento control (Ctrl). Las células fueron fijos, teñidas y fotografiadas después de 14 días. f, el nivel o knockdown o EGFR por cada uno de los shRNAs fue medido mediante el examen de los niveles de proteína EGFR por western Blot.

  • Figura 2: funcional y bioquímica interacción entre inhibición BRAF y EGFR en cáncer de colon.

    unarespuesta sinérgica o WiDr, las células a la combinación de EGFR y BRAF (V600E) inhibidores. WiDr las células fueron cultivadas en concentraciones crecientes o inhibidor BRAF PLX4032 solos, cetuximab inhibidores EGFR ( ml 1.25− 1mg) ( µ M 0,125) gefitinib o solos, o sus combinaciones. Las células fueron fijos, teñidas y fotografiadas después de 18 días. b, resistencia a BRAF (V600E) en las células es mediada a través de la inhibición de retroalimentación WiDr activación o EGFR. Respuestas bioquímicas o WiDr las células tratan con PLX4032, cetuximab, gefitinib o o sus combinaciones, se documentaron por análisis de western blot. H 6 celdas fueron cosechadas después de tratamiento de drogas. BRAF (V600E) inhibición resulta en vias fuerte o Tyr 473 p 1068-EGFR y Ser fosforilada AKT (p-AKT), que es derogado por inhibidores EGFR. Además, tratamientos de combinación resultan inhibición completa o MEK fosforilada (p-MEK) y ERK fosforilada (p-ERK). Proteínas de choque térmico 90 (HSP90) sirvieron como un control. d c, MEK o BRAF para mediar en los actos de Reglamento comentarios abajo de EGFR en células mutantes de CRC BRAF. c, inhibidor MEK activa p-EGFR en la misma medida que PLX4032. Activación del EGFR en las células tratadas con PLX4032 WiDr, VACO432 y KM20 AZD6244 o para 6 h fue analizada por western blot. d MEK-DD , impide la activación o EGFR por PLX4032. Análisis de Western blot de EGFRPURO pBabe-WiDr en células expresando el control de vectores MEK-DD (pBp) o para tratadas con PLX4032 e1 h., análisis de Western blot, mostrando que la represión o CDC25C por ARNhc independiente dos vectores resultados en niveles elevados de EGFR p WiDr en las células. f, PLX4032 tratamiento conduce a una activación reducida o CDC25C. Reglamento de retroalimentación de las células tratadas con PLX4032 CDC25C y EGFR en VACO432 1 h fueron documentadas por western blot

    • análisis.

  • Figura 3: correlación entre los niveles EGFR y responder a la inhibición de BRAF en melanoma y CRC.

    una, Western blot análisis o p-EGFR y niveles EGFR en un panel o líneas de células mutantes de BRAF (V600E) de cáncer de tiroides, melanoma y CRC. HSP90 sirvió como un control. b, altos niveles de expresión de EGFR en tipos de tumor (V600E) se correlacionan con resistencia a las mutaciones BRAF albergan PLX4032. Ensayos de inhibición de crecimiento a corto plazo o en un panel de línea de células compuesto por cáncer de tiroides (HTC-C3 y 8505C), las células de melanoma (A375) y CRC (OXCO-1, COLO741 y WiDr). Las células fueron tratadas con aumento de las concentraciones o PLX4032 de 72 h y celda viabilidad se determinó mediante CellTiter - azul midiendo la absorbancia a 540 nm en un lector de microplacas. Fechas de Error mostrar barras de ± error estándar. Medios fueron derivados (n = 4) cuatro repeticiones. c, a largo plazo colonia formación ensayo o tiroides cáncer (8505C), CRC (OXCO-1, COLO741 y WiDr) y las células de melanoma (A375). Las células fueron cultivadas en la ausencia o presencia de PLX4032 en las concentraciones indicadas para 10-14 días. Para cada línea celular, todos los platos se fija al mismo tiempo, teñidos y fotografiados. d, expresión de EGFR ectópico confiere resistencia a PLX4032, pero no a la combinación de PLX4032 y gefitinib en células de melanoma A375. PURO A375 células expresando pBabe- o control de vectores de EGFR (pBp) fueron cultivadas ( µ M 5) en PLX4032 gefitinib ( µ 2.5 M), o su combinación. Las células fueron fijos, teñidas y fotografiadas después de 7 (sin tratar o gefitinib) o 9 días (PLX4032 solos o en combinación con gefitinib). e, Western blot análisis o p-EGFR y niveles EGFR totales en las células descritas anteriormente. HSP90 sirvió como un control. f, Synergistic respuesta o tiroides cáncer HTC-C3 celdas para la combinación de EGFR y BRAF (V600E) inhibidores. HTC-C3 células fueron cultivadas en concentraciones crecientes o PLX4032 solo, cetuximab ( ml 1.25− 1mg) ( µ 2.5 M) gefitinib o solos, o sus combinaciones. Las células fueron fijadas, teñido

    • y fotografiado después de 18 días.

  • Figura 4: EGFR y sinergia para inducir apoptosis inhibidores BRAF (V600E) o células CRC y suprimir el crecimiento tumoral CRC en un modelo de xenoinjerto.